药物与相互作用的分析测试方法

３２２?ＨｅｒａｌｄｏｆＭｅｄｉｃｉｍＶ０１．２３Ｎ０．５Ｍａｙ２００４１２０Ｊｓ，Ｐ帆ｅｎ驴Ｌ，ｓ啦ｌ啪Ｍ硒由ｍＤ．＾ｌ山ｔｌｄｎⅧ麟ｉｎ蛐ｅ（ＭＤＲ）㈣ｏ盯ｒＩＢｃ—ｋｉ删唧ｈａｍｉ咖艟ｒ山ｅｒａｐｙ［Ｊ］．嘶Ｐ＾ｎ肌阢，２０（砼，８Ｂ邢ｎｅｌｌｅｓｄｌｌＭ，ｄ越．Ｒ帅印【ｏｒｑＴ０ｓｉ肿［２３］Ｒ，Ｍａ，ｅｒＬｈ枷嘶陀ｖ啊ｄｔ１８ｉ“ｇｆｍｄｄｍｍ０ｆＭＤＲａ兀ｄｍｅｍｌｅ０ｆＭＤＲ（２２）：ｌ螂一１９７２『２ｌＪ（ｋｒＩ且ｓ，ｓ妤ｓＮ柑科ｍ瑚ｈｔ㈣ｒｔｈ唧ｙ：出ｅ印一ｉｃａＩ如ｎ０ｆ涮ｍａ衄ｓ…ｒＩｎｕ日＂ｉ”ｇＡｍ缸删船，２０００，２０（６Ｂ）：４２６ｌ一４２７４ｍ。Ｐｈ一０ｋｉｎ甜ｃｓ。ｆ锄ｔｌｃ虮ｃ盯ｄｎ驿［Ｊ］”即站岫珊蛐ｈ～佃衄ｔｏ哪町ｄＩｕｇＬＪｊ．（栅Ｍｅｄ‰＾谢ｃ曲蝌【２４］ｓｄ－出ＨＧ１．，ｓ尚。眇ＲｊＤｍｇｒ翱ｎ肌ｃｅｍｄｅｃｔ岫：ｌ跚吣ｈ砌ｄｇ翻☆，２０【”，３（２）：“９一１３１．ｍｌｃｄ【鲫［Ｊ］舳ｍ＾ｂｎ删ｓｍｐ，２００２，２４３：１９—３１：２２Ｊ“岛ｈｎａＭｏ“ｍｉｏｎｏｆＰ＿ｄｙｃｏ呻ｔｅ如（ＰＧＰ）ｍｅｄｉ砌［２５］Ｐ蜘砰Ｉｉ洲８ｃ试４．ｈ椭ｌａｓｅｉｌｌｌｌｉｂｉｔ吣：Ⅲｔｌｄｒｕｇ硎ｍ删ｅ（ＭＤＲ）ｕ耐岵ｃｈ删６船ｍ：ｒｅｃ咖小…“呲ｎＩ蔺８即ｂｈｃ日Ｉ】ｃｅｒ山伽科［Ｊ］肘Ⅻ胁＾埘踟Ｈ，２００２．２Ｒ，ＭＢｙｅｒＬＤＮｊａｒＶｃｃｙ【．Ｋ＝ｈｍｍｅｒｒｍ“咖船［Ｊ］哳胁ｄｃ哳ｌ扯ｄ曲咖０ｆｓｅｋｃｔｉｖｅＭＤＲＡ舶瑚甜（３）：２６ｌ一２６９船ｍｂ，２０叭，ｌ（２）：１６３—１７４药物与ＤＮＡ相互作用的分析测试方法王君１，任百祥１，２（１．辽宁大学化学系，沈阳１１００３６；２．吉林师范大学分析测试中心，四平１３６０００）［摘要］探讨药物与Ｄ姒相互作用的分析测试方法，主要介句了足迹法、紫外光谱法、圆二色光谱法、拉曼光谱法、荧光光谱法、电化学法、ｘ射线衍射法、核磁共振法等分析测试方法。［关键词］药物；脱氧核糖棱酸；相互作用；分析测试［中国分类号］Ｒ９５【文献标识码】Ｂ［文章编号］１００奉０７８１（２００４）０５．０３２２．０２ＤＮＡ是生物的基本遗传物质，它是遗传信息的载体，基因减色效应，尤其是当其他分子以嵌人方式结合在双螺旋碱基对表达的物质基础。ＤＮＡ与药物分子相互作用的研究对探讨生之间时．变化会更加明显。汪中明等…研究了Ｌ丑（Ⅲ）．ｐｈｅｎ（邻命过程的机制、ＤＮＡ生物传感器的研制、ＤＮＡ药物的设计与合菲洛琳）配合物与ＤＮＡ的相互作用，在ｈ－ｐｈｅｎ溶液中加人ＤＮＡ成以及药物抗病机制的研究都具有重要的意义。随着ＤＮＡ与溶液后，在２２７．２啪处产生一新峰，且使瑚Ａ在２５８２硼处峰药物分子相互作用的研究的不断深人，许多方法与技术被引人移至２６２．７瑚处，由此可以肯定ｋｐｈｅｎ与ＤＮＡ的碱基对发生此研究领域。对于复杂的体系，仅用一种方法是不能够解决问了某种作用（这是由邻菲咯啉引起的）。有研究表明含有刚性题的，必须综合运用多种方法才能得到可靠的结论。下面主要环如邻菲咯啉的化合物与ＤＮＡ作用时，是插入到ＤＮＡ的碱基探讨药物与ＤＮＡ相互作用的分析测试方法。对之间而发生作用。１足迹法３圆＝色光谱（ｃＤ）法足迹法是生物学中用来研究ＤＮＡ与药物分子相互作用的ｃＤ是以高频变换的左旋或右旋偏振光作为人射光，～方最基本的手段。多数药物与Ｄ口４Ａ的结合是一种可逆的平衡方面根据ＤＮＡ在２回珊处的吸收能提供有关其结构的信息．另式的相互作用（非共价结台），它们并不与ＤＮＡ发生持久的结一方面对一些本身虽然没有ｃＤ信号，但在与删Ａ结合后能产合，所以研究这类药物的结合点必须用ＤＮＡ足迹法。在该分析生诱导ｃＤ的分子，可获得一定的有关其结构的间接信息。王法中用高分辨率的聚丙烯胺凝胶电泳可以获得药物与ＤＮＡ结云普等０１研究了水溶性高分子金属钴卟啉配合物与小牛胸腺合的热力学、动力学数据以及药物与蹦Ａ的精确结合点。１９踮ＤＮＡ的相互作用．并测其皿图，发现当加入金属钴卟啉配合物年ｍⅢ∞和ｏｏｔｆｌ∞发明了转录足迹茫，应用转录足迹法除了时，ＤＮＡ的ｃＤ图基线向负峰移动，正负峰之间的差值减小，且获得位点特异性动力学信息外，还可以测定药物较高的序列特正峰由２６９脚红移至２”肿，而２４０衄的负峰也红移至２４３异性。利用这种方法，Ｐｈｉｌｌｉｐｓ等测定了放线菌素Ｄ、偏端霉素、唧。表明该金属钻卟啉配合物与ＤＮＡ发生了较强的嵌插作用棘霉素、阿霉素和诺加霉索的序列特异性。最近对这种技术的（金属卟啉配合物大的平面环疏水结构和亲水基团的引入促进研究已扩展到了新的双向转录足迹法，该方法可以高度精确地了这种作用），使ＤＮＡ发生变性。定位各个药物结合位点（±１个碱基对）。４拉曼光谱法２紫外光谱法共振拉曼光谱（ＲＩＩｓ）和表面拉曼光谱（ｓＥＲｓ）近几年来在由于ＤＮＡ碱基及磷酸氧是许多药物与之结合的位点，结合ＤＮＡ复合物的结构研究中应用较为普遍。该方法无论在均相药物后会导致２６０帅附近特征吸收峰的吸收谱带变宽、红移及递质还是多相递质中都可以方便应用，并有可能提供多相微环［收稿日期］２００３埘ｏｌ［修回日期】２∞，－∞—０６境对其他分子与ＤＮＡ相互作用的影响。ＲＲｓ由于具有对生色【作者简介］王君（１９６０一）．男，辽宁沈阳人，博士，教授，主要从团振动的选择性及其对ＤＮＡ复合物结构的敏感性而广泛应用，事化合物及生物无机化学研究工作。而ｓ瓯ｓ则有效地克服了ＲＲｓ无法对荧光干扰的化合物进行研万　方数据医药导报２００４年５月第２３卷第５期３２３?究的缺点，而它们所有的短程增强特性可用ｆＤＮＡ复合物拓扑结构的研究…。叶勇等４研究ｒｎ氨基葡萄糖甘氨酸混配金属配合物（ＭＧｌｕＧ）与ＤＮＡ的作用，研究表明：在配合物一银胶体系加入ＤＮＡ后，ｓＥ陷光谱发牛了变化——ｃｕｃＪｕｃ与ＤＮＡ发生ｒ配合物整体平面插人ＤＮＡ碱基对的作用，ｃ０Ｇ】ｕＧ与ＤＮＡ发生了配合物与ＤＮＡ磷酸氧的共价键作用。５荧光光谱法荧光光谱法是研究生物大分子与小分子、离子相互作用的重要的手段，而且可以测定相互作用的结合常数。由于洲Ａ分子的内源荧光很弱，故多采用荧光探针，如溃化乙啶（ＥＢ）、ＢＥＲ等。ＥＢ为一扁平分子，本身荧光较弱，它可以以插入方式与ＤＮＡ中螺旋碱基结合，使其荧光加强；当ＥＢ从ＤＮＡ中出来或ＤＮＡ积螺旋减少时，荧光发生猝灭。ＥＢ还可以指示药物与ＤＮＡ的作用方式。根据ｓｃａｔｃｈａｒｄ方程：ｒ，ｃ＝＾（ｎ—ｒ），式中ｒ是ＤＮＡ上平均每个核苷酸键台的耶分子数，ｎ是每个核苷酸上的成键位点数，＾是每一点故有的结合常数，ｃ是自由ＥＢ的浓度，以ｒ，ｃ对ｒ作图得到一条直线。利用药物存在下的ｓｃａｔｃｈａ珂图可判别药物的作用方式。１。若该直线与Ｓｃ出ｈａＩｄ图有相同的ｎ值、不同的＾值，则该药物与ＤＮＡ的作用方式为嵌插方式，即药物与ＥＢ对ＤＮＡ上同一点的结合是竞争性的；若该直线与ｓｃａ制图有相同的壬值、不同的ｎ值．则该药物与ＤＮＡ的作用方式为静电作用，即药物与ＥＢ对ＤＮＡ上不同位点的结台是非竞争性的；若该直线与ｓｃ日ｔｃｈａｒｄ图ｎ值和＾值都不同，则该药物与ＤＮＡ的作用方式为混合方式。另外，还可以以药物本身含有的生色团作探针来研究药物分子与ＤＮＡ的相互作用”】。６电化学法电化学法具有高灵敏度和高选择性，并且它不会受到传统生物品中的混浊、黄疽等颜色的干扰．近年来在生命领域得到了较为广泛的应用。当具有电化学恬性的药物分子与ＤＮＡ分子相互作用后，药物分子的特征还原电流会下降。电化学法虽然在一定程度上受分子电活性与否的限制，却有可能用直接或间接电化学法方便进行研究，尤其是对一些主要通过静电结合模式与ＤＮＡ相互作用的分子，可获得许多其他方法无法得到的信息。基于ＤＮＡ修饰电极发展起来的表面电化学方法具有简便、可靠以及ＤＮＡ用量少等优点。包晓玉等”１利用循环伏安法研究了芦丁与ＤＮＡ的相互作用．实验表明ＤＮＡ的存在能导致芦丁氧化还原峰电流降低，峰电位基本不变，并求得二者的结合常数。最近王素芬等”１用循环伏安法、示差脉冲伏安法、计时库仑法、整体电解法和扫描电化学显微镜研究了具有抗癌活性的双苯并咪唑衍生物不可逆电化学行为及其与ＤＮＡ的相互作用，测定了二者的结合常数和结合位点数，并断定结合方式主要为包含４个碱基对的紧密小沟结合。７ｘ射线衍射法ｘ射线衍射法是一种显现生物大分子三维结构的最有效技术，以获得ＤＮＡ分子及其药物一洲Ａ复合物的三维空间结构信息——键长、键角、立体化学性质和绝对构型等，给人们提供了关于ＤＮＡ分子和药物一ＤＮＡ复合物的前所未有的清晰图象。药物分子与矾Ａ分子结合后一定会引起ＤＮＡ结构的变化，用ｘ射线晶体衍射并通过分子动力学模拟计算，可获得非常详细的药物分子与帅Ａ分子结合位点、结构变化的信息以及一定的动力学数据。ｘ射线晶体衍射研究表明：碱基对之间正常的旋转角为３６０，由于药物嵌插，螺旋解链，造成螺旋旋转角的减少，不同的药物嵌插剂及不同的ＤＮＡ序列所造成的解链程度是不同的，如乙啶及丙基哌啶与ＤＮＡ嵌插时解链角是孵，而吖啶及啶橙的解链角是１７。；柔红霉索与六聚核苷酸ｄ（ｃ四ＡｃＧ）２复合物中的药物生色团插入在ｃｃ位置，而柔红胺位于小淘区。８磁共振法２０世纪８０年代以来，随着磁共振（删）技术的发展，ｍ波谱学已成为阐述溶液中生物大分子三维空阃结构的效力最强的技术。不同特征的螺旋结构提供了用ＭＲＩ技术研究药物分子与ＤＮＡ分子相互作用的基础，不同的ＤＮＡ构象有着相应特征的ＮＯＥｓＹ谱和ｃｏｓＹ谱，它们分别提供ＮｏＥ交叉峰信息数据组的起始点和键的连接信息。Ｂ唧ｉｌ是一种在ＤＮＡ小沟区结合的抗锥虫病药，ＤＮＡ足迹法表明Ｂ唧ｌｉｌ与纺锤霉素一样优先结合在至少４个碱基对长度的ＡＴ富集区．但利用染色体蛋白质删ｏＩ（与蹦ＡＡＴ富集区结合的探针）所进行的竞争性反应表明‰１１ｉｌ是比纺锤霉紊和偏端霉素更弱的结台配基。通过姗对姗ｌ与ｄ（ｃＧｃＧ从ｃＧｃ∽２复合物的研究表明Ｂ骶ｎ丑是在ＤＮＡ小沟区与双链中心部分结合的，而双螺旋还保持Ｂ构型，Ｂｅ聪向的脒质子或结合在外部胸腺嘧啶碱基的ｏ－２位或结合在内部腺嘌呤碱基的Ｎ一３位。另外，ＭＩＩＩ波谱研究结构是对ｘ射线衍射法的重要补充，因为前者得到的是样品在溶液中的结构数据，而后者得到的是样品在晶体中的结构数据。［参考文献】【１】狂中明，周志芳．林华宽、等．２，９＿二甲基，ｌ，１０－菲咯啉的ｍ．丙氨酸衍生物的台成表征及其镧（Ⅲ）配合物与ＤＮＡ作用光谱研究［Ｊ］无机化学学报。２０００，１６（３）：５∞一５０８［２］王云普，萧耀南．王荣民水溶性高分子金属卟咻络合物的合成及其与删Ａ作用的研究［Ｊ］．西北师范太学学报（自然科学版）．２０００，３６９（１）：柏一４４．［３］叶勇，胡继明，曾云鹗３种希夫碱化合物对删Ａ作用的表面增强拉曼光谱研究【ｊ］光散射学报，１９９９，１１（３）：１９０一１９５［４］叶勇，胡继明，尹新强Ⅱ氨基葡萄糖甘氨酸混配金属配合物与ＤＮＡ作用的光谱研究［Ｊ］分析测试学报，２０００，１９（１）：”一柏．［５］李来生，王宇晓．荧光法研究金属配台物与ＤＮＡ的相互作用［Ｊ］江西师范大学学报（自然科学版），２００１．２５（４）：２卯一２３２［６］杨周生．于俊生邻二氮菲一ｃｄ～（２＋）与ＤＮＡ的相互作用研究［Ｊ］．无机化学学报，２００２，１８（４）：３＿７３—３７６【７］包晓玉，陈建属芦丁与硎Ａ相互作用的电化学研究【Ｊ］．分析试验室。２呻ｌ，２０（２）：Ｉ一３［８］王素芬，彭图治，李建平．电化学方法研究硼Ａ与不可逆靶向分子的相互作用ｆＪｌ化学学报，２００２，６０（２）：３１０—３１６万　方数据

文章来源：《分析测试技术与仪器》 网址: http://www.fxcsjsyyq.cn/qikandaodu/2021/0314/548.html